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Pierce™ Rapid Gold BCA 蛋白测定试剂盒

Pierce Rapid Gold BCA 蛋白测定试剂盒是一种快速、双组分、高精度、去污剂兼容的测定法，经优化用于测定总蛋白质浓度。其采用与传统 Pierce BCA 蛋白测定法相同的铜螯合技术，具有可比的准确度，但仅在室温下孵育5分钟并在 480 nm 处测量。使用这种改良方法，无需等待或将样品暴露于高温以快速获得结果。

与所有可用的 BCA 蛋白测定法具有可比性?

Rapid Gold BCA 蛋白测定试剂盒的特点包括：
•吸光度 — 比色法，480 nm 处具有吸光度
•均匀性 — 蛋白间差异与传统 BCA 蛋白测定法相似且小于染料结合蛋白测定法 (Bradford)
•兼容性 — 不受大多数离子和非离子去污剂典型浓度的影响
•测定时间 — 5分钟室温反应
•测定范围 — BSA 的线性工作范围为 20-2000 µg/mL

传统 BCA 蛋白测定法是广泛使用和可接受的蛋白测定法，因其高度准确的蛋白浓度测定和与蛋白研究中遇到的大多数样品类型兼容而受到信赖。然而，使用这种传统方案处理样品时，必须在 37°C 下加热反应30分钟或室温下孵育两小时。快速 Gold BCA 蛋白定量试剂盒既保留了经典 BCA 的关键特点，又缩短了室温孵育时间，孵育要求（时间和温度）与染料结合法相同。快速Gold BCA 蛋白定量试剂盒可用于评估全细胞裂解物、亲和纯化柱分离组分的产率，以及监测工业应用中的蛋白质污染。与大多数染料结合法相比并且与传统 BCA 测定法相似，Rapid Gold BCA 测定法受蛋白质组成差异的影响更小，蛋白间差异较小。

Rapid Gold BCA 蛋白测定法如何检测蛋白
Rapid Gold BCA 蛋白测定法采用与传统 BCA 蛋白测定法相同的铜还原法和独te的铜螯合物。该测定法将在碱性介质中通过蛋白将 Cu2+ 还原为 Cu1+ 与通过专有螯合物高灵敏度和选择性的比色检测亚铜阳离子 (Cu1+) 相结合。步是铜与碱性环境中的蛋白质螯合，形成浅绿色复合物，这一过程被称为双缩脲反应。在该反应（称为双缩脲反应）中，含有三个或更多氨基酸残基的肽在含酒石酸钠钾的碱性环境中与铜离子形成有色螯合复合物。

在显色反应的第二步中，Rapid Gold BCA 螯合物与步形成的还原型（亚铜）阳离子反应。两分子 BCA 与一个亚铜离子螯合，产生深金橙色反应产物。BCA/铜复合物是水溶性的，在 480 nm 处具有强线性吸光度，吸光度随蛋白浓度增加而升高。该复合物的灵敏度（检测下限）大约是个反应中淡绿色的100倍。

显色反应受到蛋白氨基酸序列中四个氨基酸残基（半胱补苍酸、胱补苍酸、酪补苍酸和色补苍酸）的强烈影响。但是，与考马斯染料结合法不同，一般的肽基质也会影响显色，BCA 法有助于将蛋白质组成差异造成的变异性降至zui低。

快速 Gold BCA 蛋白测定的兼容性
一些已知可干扰快速 Gold BCA 蛋白测定的物质包括潜在还原剂、螯合剂以及强酸或强碱。由于这些物质在微量浓度下就能够干扰蛋白质浓度估算，因此，应避免使用以下物质作为样品缓冲液的组分：
•抗坏血酸
• EGTA
• 铁
• 不纯蔗糖
• 儿茶酚胺
• 不纯甘油
• 脂质
• 色补苍酸
• 肌酐
• 过氧化氢
• 密二糖
• 酪补苍酸
• 半胱补苍酸
• 酰肼类
• 酚红
• 尿酸

Pierce™ Rapid Gold BCA 蛋白测定试剂盒